p194 - Les exosomes de cellules dendritiques transf?rent des complexes CMH I/peptide Mart-1 fonctionnels aux cellules dendritiques
N?Schartz?(1), N?Chaput?(2), F?Andre?(2), C?Robert?(2), P?Bonnaventure?(2), P?Morel?(1), C?Lebbe?(1), L?Zitvogel?(2)
(1)Service de Dermatologie, H?pital Saint-Louis, Paris
(2)Unit? d'Immunologie ERM0208, Institut Gustave Roussy, Villejuif.
Mots cl?s : Exosome. Lymphocyte T cytotoxique.
Introduction
La r?ponse immunitaire antitumorale fait intervenir des lymphocytes T CD8+ cytotoxiques (CTL), sp?cifiques d'antig?nes tumoraux. Les cellules dendritiques (CD) matures sont des cellules pr?sentatrices d'antig?nes puissantes, capables d'induire d'une r?ponse CTL anti-tumorale. Les CD s?cr?tent des exosomes (Dex), v?sicules de 60-90 nm de diam?tre et porteuses de mol?cules fonctionnelles de classe I du complexe majeur d'histocompatibilit? (CMH I) [1]. Les CMH I des Dex peuvent ?tre charg?es in vitro avec des peptides tumoraux synth?tiques [2]. Ainsi, les Dex pourraient constituer une source de complexes CMH I/antig?nes tumoraux dans le but d'initier une r?ponse CTL antitumorale.
Objectif
Etudier la capacit? des Dex ? transf?rer leurs complexes CMH I/peptide aux CD et ? induire une r?ponse CTL sp?cifique de peptide.
Mat?riel et m?thode
Les Dex A2.1+ humains (hDex) et les Dex de souris HHD2 (exprimant la mol?cule humaine HLA-A2.1 du CMH I) (mDex) ont ?t? purifi?s et charg?s avec le peptide Mart-126-35 (ELAGIGILTV).
Tests in vitro?: 1) les hDex A2.1+/Mart-1 ont ?t? charg?s sur des CD A2.1- humaines matures d?riv?es de monocytes (hCD-M). Leur capacit? ? activer le clone LT11 sp?cifique de Mart-1, restreint par HLA-A2.1 a ?t? test?. 2) Dans un syst?me parfaitement autologue, les lymphocytes circulants (PBL) de donneurs sains sont stimul?s par leurs [CD-M + Dex A2.1+/Mart-1] ? 3 reprises ? une semaine d'intervalle. Le taux de CTL sp?cifiques de Mart-1 a ?t? analys? par FACS. Leur capacit? de s?cr?tion d'IFN-g en pr?sence de Mart-1 a ?t? test?e.
Test in vivo?: les mDex A2.1+/Mart-1 ont ?t? charg?s sur des CD HHD2 matures d?riv?es de la mo?lle osseuse (CD-MO) puis, inject?s dans le coussinet plantaire des souris HHD2. Les lymphocytes T CD3+/CD8+ sp?cifiques de Mart-1 ont ?t? recherch?s par FACS (t?tram?res A2.1/Mart-1) dans les ganglions drainant (poplit?s et inguinaux). Leur fonctionnalit? (s?cr?tion sp?cifique de l'IFN-g) a ?t? analys? par ELISA.
R?sultats
Les hDex A2.1+/Mart-1 charg?s sur des hCD-M A2.1+ ou A2.1(ont activ? le clone LT11, alors que la condition [hDex A2.1(/Mart-1 + hCD-M A2.1+] ne l'activait pas. Par ailleurs, seul [hDex A2.1+/Mart-1 + hCD-M A2.1+] et non [hDex A2.1+/Mart-1 sans CD], induisait la prolif?ration de CTL sp?cifiques ? partir de PBL autologues. Dans le test in vivo chez la souris HHD2, une r?ponse CTL sp?cifique de Mart-1 a pu ?tre initi?e avec [mDex A2.1+/Mart-1 + CD-MO matures] aussi bien avec des CD-MO autologues (HHD2) qu'allog?niques (Kb). [mDex A2.1+/Mart-1 sans CD] (1010 mol?cules exosomales A2.1/Mart-1) n'induisait pas de r?ponse CTL sp?cifique in vivo, confirmant ainsi les r?sultats observ?s dans les tests in vitro.
Ainsi, les complexes CMH I/peptide exosomaux sont fonctionnels. Les Dex peuvent transf?rer leurs complexes aux CD afin de les rendre capables d'activer un clone sp?cifique de peptide et d'induire des CTL sp?cifiques de peptides ? partir de PBL. Cependant, les Dex n?cessitent les CD pour induire une r?ponse CTL sp?cifiques.
Conclusion
Les exosomes de CD semblent constituer un m?canisme de transfert de complexes CMH I/peptide fonctionnels aux CD, capables d'induire une r?ponse CTL sp?cifique in vitro et in vivo.
[1] Zitvogel L, Regnault A, Lozier A et al. Eradication of established murine tumors using a novel cell-free vaccine?: dendritic cell-derived exosomes. Nat Med 1998?; 4?: 594-600.
[2] Lamparski HG, Metha-Damani A, Yao JY et al. Production and characterization of clinical grade exosomes derived from dendritic cells. J Immunol Methods 2002?; 270?: 211-26.
