c90 - Les exosomes, une source d'antig?nes tumoraux, m?lang?s aux CpG, induisent une r?ponse Tc1 sp?cifique conduisant au rejet tumoral de m?lanome
N?Schartz?(1), N?Chaput?(2), C?Robert?(2), P?Bonnaventure?(2), P?Morel?(1), C?Lebb??(1), L?Zitvogel?(2)
(1)Service de Dermatologie, H?pital Saint-Louis, Paris
(2)Unit? d'Immunologie ERM0208, Institut Gustave Roussy, Villejuif.
Mots cl?s : M?lanome (rejet tumoral).
Introduction
De nombreux vaccins antitumoraux visent ? induire des lymphocytes T CD3+/CD8+ effecteurs et m?moires, sp?cifiques de tumeur. Les exosomes (Dex) de celllules dendritiques (CD) sont des v?sicules de 60-90 nm de diam?tre, issus de la voie d'endocytose. Ils sont s?cr?t?s par des CD vivantes et constituent une nouvelle source d'antig?nes tumoraux [1]. En effet, les Dex sont porteurs de mol?cules fonctionnelles du CMH I et II qui peuvent ?tre charg?es directement avec des peptides tumoraux synth?tiques. Par ailleurs, les Dex sont stables et peuvent ?tre produits de fa?on standardis?e dans des conditions de grade clinique [2], ce qui a permis leur utilisation dans un essai clinique de phase I dans le m?lanome.
Objectif
Au vu des r?sultats encourageants de l'essai clinique de phase I utilisant des Dex seuls, l'objectif de cette ?tude ?tait de potentialiser la r?ponse immune antitumorale des Dex in vivo par l'adjonction d'un adjuvant.
Mat?riel et m?thode
Les Dex de souris HHD2 (souris exprimant la mol?cule de CMH I humain HLA-A2.1) (mDex) et les Dex A2.1+ humains (hDex), sont purifi?s et charg?s avec les peptides Mart-1(ELAGIGILTV) ou gp100(KTWGQYWQV) et gp100(IMDQVPFSV). Tests in vivo?: les mDex A2.1+/Mart-1 sont inject?s avec diff?rents adjuvants dans le coussinet plantaire des souris HHD2. Le taux des lymphocytes T CD3+/CD8+ (Tc1) sp?cifiques de Mart-1 a ?t? analys? par FACS (t?tram?res A2.1/Mart-1) dans les ganglions de drainage (poplit?s et inguinaux). Leur capacit? ? s?cr?ter de l'IFN-g en pr?sence de Mart-1 a ?t? test?e in vitro (ELISA). Dans des tests de croissance tumorale (mod?les pr?ventif et curatif), la taille de la tumeur de m?lanome murin B16F10 transfect? par l'HLA-A2.1 et gp100, apr?s immunisation avec des hDex A2.1/gp100, a ?t? suivie pendant 31 jours.
R?sultats
La condition [mDex A2.1/Mart-1 + CpG] (1010 mol?cules A2.1/Mart-1) induisait une r?ponse lymphocytaire T cytotoxique (Tc1) sp?cifique de Mart-1 (5-7?% de cellules CD3+/CD8+/t?tram?res Mart-1+), significative (p < 0,01) par rapport aux mDex A2.1 non charg?s. [mDex/Mart-1 + CpG] ?tait plus efficace que [peptide Mart-1 + CpG] et aussi efficace que [Dex + CD autologues matures] ? induire une r?ponse Tc1 sp?cifique. Parmi les autres adjuvants test?s, le poly [I]?: [C12U] (Ampligen??: un ARN double brin), le Murabutide, l'interleukine (IL)2 et l'interf?ron (IFN)-a, seul l'Ampligen? induisait une r?ponse Tc1 sp?cifique de Mart-1. Cependant, l'Ampligen? ?tait moins efficace que le CpG. Les tests de pousse tumorale montraient que [hDex/gp100 + CpG] (1010 mol?cules A2.1 charg?es avec les deux peptides de gp100), emp?chait significativement (p < 0,05) la pousse tumorale dans 40?% des animaux ? la fin de l'exp?rience ? J31.
Conclusion
Dans un mod?le murin, les s?quences CpG semblent ?tre l'adjuvant optimal dans la vaccination contre le m?lanome par les exosomes de cellules dendritiques porteurs de peptides tumoraux.
[1] Zitvogel L, Regnault A, Lozier A et al. Eradication of established murine tumors using a novel cell-free vaccine?: dendritic cell-derived exosomes. Nat Med 1998?; 4?: 594-600.
[2] Lamparski HG, Metha-Damani A, Yao JY et al. Production and characterization of clinical grade exosomes derived from dendritic cells. J Immunol Methods 2002?; 270?: 211-26.
