c45 - Diagnostic des onychomycoses par PCR?: application clinique
J?Menotti?(1), M?Machouart?(2), M?Benderdouche?(1), C?Cetre-Sossah?(3), P?Morel?(4), L?Dubertret?(4), F?Derouin?(1), M?Feuilhade de Chauvin?(1), C?Lacroix?(1)
(1)Laboratoire de Parasitologie-Mycologie, H?pital Saint-Louis, Paris
(2)Laboratoire de Parasitologie-Mycologie (EA3520), Universit? Paris 7, Paris
(3)Bioadvance, Euroimmun, Emerainville
(4)Service de Dermatologie, H?pital Saint-Louis, Paris.
Mots cl?s : Onychomycose (PCR).
Introduction
Le diagnostic des onychomycoses repose classiquement sur l'examen microscopique direct et la culture. Il n'est performant que lorsqu'il est r?alis? sur un pr?l?vement de la l?sion active (pr?l?vement proximal). Lorsque le pr?l?vement est r?alis? sur la partie distale de l'ongle, l'examen mycologique est fr?quemment n?gatif. Notre objectif est d'?valuer une technique originale de PCR associ?e ? une digestion enzymatique (PCR-RFLP) pratiqu?e sur des pr?l?vements d'ongle (proximal et distal) pour le diagnostic des onychomycoses ? dermatophytes ou ? Scytalidium.
Mat?riel et m?thodes
L'?tude a ?t? r?alis?e de fa?on prospective chez des patients pr?sentant des l?sions ungu?ales suspectes d'onychomycoses. Dans une premi?re s?rie, 48 ongles ont ?t? pr?lev?s au niveau de la l?sion active (pr?l?vement proximal). Dans une deuxi?me s?rie, chez 88 patients suspects d'onychomycoses, un pr?l?vement distal de l'ongle (impropre ? l'examen mycologique) et un pr?l?vement proximal ont ?t? effectu?s en parall?le. Une partie de chaque ?chantillon a ?t? trait?e par des techniques mycologiques classiques, l'autre partie ?tant utilis?e pour la PCR-RFLP en aveugle des r?sultats mycologiques. La PCR-RFLP a ?t? r?alis?e par amplification puis digestion enzymatique d'un fragment du g?ne codant pour l'ARN ribosomal 18S des dermatophytes ou des Scytalidium. Les r?sultats sont obtenus en 24 heures.
R?sultats
Dans la premi?re s?rie de 48 patients, 30 patients pr?sentaient une onychomycose prouv?e par l'examen mycologique?; la PCR-RFLP a ?t? positive dans 29 cas, soit une sensibilit? de 93?% et une sp?cificit? de 94?% par rapport ? l'examen mycologique. Dans la deuxi?me s?rie de 88 patients, visant ? ?valuer les performances de la PCR-RFLP sur les pr?l?vements distaux, 69 patients pr?sentaient une onychomycose prouv?e par l'examen mycologique du pr?l?vement proximal?; la PCR-RFLP pratiqu?e sur le pr?l?vement distal a ?t? positive dans 64 cas sur 69 (sensibilit? 93?%), alors que la culture r?alis?e sur 41 de ces pr?l?vements distaux n'a ?t? positive que dans 6 cas (sensibilit? 15?%).
Commentaires
Comparativement ? l'examen mycologique classique, la sensibilit? et la sp?cificit? de la PCR-RFLP sont excellentes sur des pr?l?vements r?alis?s au niveau de la l?sion fongique. Du fait de la persistance de l'ADN du champignon dans l'ongle ? distance de la l?sion active, la PCR-RFLP reste tr?s performante sur des pr?l?vements distaux qui sont totalement impropres ? l'examen mycologique.
En pratique, ? partir d'un pr?l?vement d'ongle proximal ou distal, la PCR-RFLP est un outil sensible et rapide pour le diagnostic d'une onychomycose ? dermatophytes ou ? Scytalidium.
