c5 - Les autoanticorps IgG de la pemphigo?de gestationis reconnaissent (en plus de l'?pitope NC16A) des ?pitopes pr?sents sur le domaine intracellulaire de l'antig?ne PB180
G?Di Zenzo?(1), V?Calabresi?(1), F?Grosso?(1), M?Ruffelli?(2), M?Caproni?(3), G?Zambruno?(1)
(1)Laboratoire de Biologie Mol?culaire et Cellulaire, IDI-IRCCS, Rome, Italie
(2)D?partement de Pathologie Clinique et Mol?culaire, IDI-IRCCS, Rome, Italie
(3)D?partement de Science Dermatologique, Universit? de Florence, Florence, Italie.
Mots cl?s : Pemphigo?de gestationis (cartographie ?pitopique).
Introduction
La pemphigo?de gestationis (PG) est une dermatose bulleuse auto?mmune sous-?pidermique de la grossesse, proche sur le plan clinique et immunologique de la Pemphigo?de bulleuse (PB). La cible antig?nique majeure des autoanticorps de la PG et de la PB est l'antig?ne PB180, composant transmembranaire des h?midesmosomes ?pidermiques. Il a ?t? montr? que les autoanticorps IgG de la PG reconnaissent le segment non-collag?nique NC16A de l'ectodomaine de l'antig?ne PB180 imm?diatement adjacent ? la membrane plasmique [1]. Le passage transplacentaire d'autoanticorps anti-PB180 de la m?re vers le nouveau-n? peut provoquer une ?ruption bulleuse transitoire, en faveur du r?le pathog?ne de ces autoanticorps [2]. Contrairement ? la PB, les autoanticorps IgG de la PG semblent avoir une r?activit? tr?s restreinte vis-?-vis de l'?pitope NC16A puisqu'aucun autre ?pitope associ? aux s?rums de la PG n'a ?t? encore identifi? [3]. Afin de mieux caract?riser la r?ponse humorale de la PG contre l'antig?ne PB180, nous avons analys? la r?activit? de 13 s?rums de PG contre 15 ?pitopes de PB180 pr?sent?s sur la surface du phage lambda.
Mat?riel et m?thodes
15 ?pitopes de PB180 avaient ?t? pr?alablement s?lectionn?s par criblage d'une banque al?atoire d'?pitopes de l'antig?ne PB180 dans le phage lambda avec des s?rums de patients atteints de PB. Les clones des phages pr?sentant diff?rents ?pitopes de l'antig?ne PB180 ont ?t? utilis?s comme cible pour la proc?dure d'immunoscreening (IS), ainsi que pour un test ELISA avec des s?rums de PG. Pour l'IS, le lysat de chaque clone a ?t? ensemenc? pour obtenir de plages de lyse qui ont ?t? transf?r?es sur des filtres de nitrocellulose, alors que pour le test ELISA le lysat phagique a ?t? li? ? un anticorps polyclonal anti-lambda d?pos? sur boite. De plus, un fragment de ADNc correspondant ? un ?pitope particulier, codant la s?quence peptidique AA 316-367, a ?t? clon? comme prot?ine de fusion avec la glutathion S-transf?rase (GST). Cette prot?ine recombinante (GST-316-367) a ?t? aussi utilis?e pour g?n?rer un anticorps polyclonal par immunisation de lapins et pour immunopurifier des IgG sp?cifiques anti-PB180 ? partir d'un s?rum de PG.
R?sultats
La majorit? des s?rums de PG ?tudi?s (11/13) r?agissaient avec un ?pitope correspondant ? la s?quence AA 508-541, localis?e dans le domaine NC16A. De fa?on inattendue, 8/13 s?rums de PG (62?%) r?agissaient aussi avec plusieurs ?pitopes localis?s dans le domaine intracellulaire (DIC) et extracellulaire (DEC) de PB180. En particulier, 7/13 s?rums de PG (54?%) r?agissaient avec des ?pitopes dans le DIC de PB180?: AA 120-160, AA 151-170, AA 176-203, AA 292-367, AA 299-354 et AA 353-399. Dans le DEC de PB180, en plus du domaine NC16A, 3 s?rums de PG r?agissaient avec les sites antig?niques AA 915-985 et AA 1331-1404. A l'aide de la GST-316-367, nous avons par la suite d?montr? que cette r?gion restreinte ?tait ?galement reconnue dans ce contexte mol?culaire diff?rent par les 5 s?rums de PG r?agissant avec AA 292-367. L'anticorps polyclonal de lapin g?n?r? contre la GST-316-367 ainsi qu'un s?rum immunopurifi? de PG r?agissaient avec PB180 ? la fois en immunoblot (IB) et en immunofluorescence indirecte (IFI).
Commentaires
Nos r?sultats r?v?lent pour la premi?re fois des ?pitopes reconnus par des autoanticorps IgG de la PG ? la fois dans le DIC et le DEC de l'antig?ne PB180, en plus de l'?pitope NC16A. Nous avons notamment identifi? un ?pitope immunodominant dans le DIC (AA 316-367) qui est reconnu dans le contexte de la mol?cule PB180 ? la fois dans des conditions d?naturantes (IB) et natives (IFI). Des ?tudes suppl?mentaires sont n?cessaires pour ?valuer le r?le possible de ces nouveaux sites antig?niques dans le d?clenchement et/ou le d?veloppement de la PG.
[1] Giudice GJ et al. J Invest Dermatol 1994?; 102?: 878-81.
[2] Jordon RE et al. J Clin Invest 1976?; 57?: 1426-31.
[3] Perriard J et al. J Invest Dermatol 1999?; 112?: 141-7.
