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TRANSLOCATION DE LA PHOSPHATIDYLINOSITOL-3 KINASE SUR LE RETICULUM ENDOPLASMIQUE HEPATIQUE ET INHIBITION DE LA GLUCOSE-6 PHOSPHATASE EN SITUATION POSTPRANDIALE CHEZ LE RAT. N. DANIELE, B. PAYRASTRE1, C. ZITOUN , G. MITHIEUX. INSERM U 449 ET 3261, Lyon et Toulouse. Nous avons ?tudi? le m?canisme mol?culaire d'inhibition de la glucose-6?phosphatase (Glc6Pase), derni?re enzyme intervenant dans la production h?patique de glucose, en situation postprandiale. En utilisant une proc?dure rapide d'isolement des microsomes, nous montrons que l'activit? de la Glc6Pase h?patique est inhib?e apr?s 6h de r?alimentation chez le rat ayant pr?alablement je?n? 48h?: 65???2 vs 96,5???3 (en pr?sence de 1?mM Glc6P) et 225???6 vs 306???9 (20?mM Glc6P) nmol de glucose hydrolys?/min/mg prot. moyenne???E.S., n?=?12, p 0,001. La quantit? de Glc6Pase immunor?active (western blot) n'est pas diminu?e dans les microsomes de rat r?aliment? par rapport aux microsomes de rat ? jeun. La quantit? de p85 (sous-unit? r?gulatrice) immunor?active et l'activit? catalytique de la PI3K, ainsi que la quantit? d'IRSl (insulin receptor substrate 1), sont augment?es d'un facteur?2,6, 2,4 et 2,6 (p 0,01), respectivement, dans les microsomes de rats r?aliment?s. La totalit? d'IRS1?li? aux microsomes est d?tect?e dans les immunopr?cipit?s de p85. Apr?s s?paration des membranes microsomiques en gradient de densit? de saccharose, la p85 est d?tect?e dans toutes les fractions (membranes plasmiques et r?ticulum endoplasmique). La Glc6Pase est inhib?e in vitro en pr?sence de phosphatidyl-inositol-3,4 bisphosphate (m?canisme comp?titif, Ki?=?5,0???0,7??M, moyenne???E.S., n?=?3), et de phosphatidylinositol-3,4,5?trisphosphate (Ki?=?1?7?? 0,7??M). Elle n'est pas inhib?e en pr?sence de nombreux autres phospholipides. Ces r?sultats sugg?rent fortement qu'un m?canisme de translocation de la PI3K sur les microsomes h?patiques, d?clench? par IRS1, se produit au cours de la r?alimentation chez le rat. Ce processus, par l'interm?diaire des produits de l'activit? de la PI3K, pourrait rendre compte de l'inhibition de la Glc6Pase et participer ? l'inhibition de la production h?patique de glucose se produisant dans cette situation. |
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