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CARACTERISATION DES REGIONS REGULATRICES DU PROMOTEUR DU GENE DE LA GLUCOSE-6-PHOSPHATASE DANS LES CELLULES HEPG2 ; ETUDE DE LEUR REGULATION HORMONALE ET NUTRITIONNELLE. F. RAJAS, S. DUVERNAY, S. TARPIN, G. MITHIEUX. INSERM U 449, FACULTE LAENNEC, RUE GUILLAUME PARADIN, 69372 LYON CEDEX 08. La glucose-6-phosphatase (G6Pase) est une enzyme essentielle du m?tabolisme glucidique, permettant la lib?ration du glucose endog?ne dans le sang. Son expression est augment?e au cours du diab?te, et est normalis?e apr?s traitement par l'insuline. Pour mieux comprendre les m?canismes de r?gulation au niveau transcriptionnel de l'expression du g?ne de la G6Pase, nous avons entrepris l'?tude de l'activit? promotrice de ses r?gions r?gulatrices. La r?gion -1640/+?60?pb du g?ne de la G6Pase de rat a ?t? d?l?t?e progressivement et clon?e en amont d'un g?ne rapporteur lucif?rase (pGL2basic). L'activit? promotrice des fragments a ?t? ?tudi?e par transfection transitoire dans des cellules h?patocytaires HepG2 et dans des cellules t?moins HeLa et standardis?e par comparaison avec l'activit? du plasmide RSV-CAT. Le fragment -?80/+?60?conf?re l'activit? promotrice minimale et la tissu-sp?cificit? puisqu'aucune expression n'est observ?e dans les cellules HeLa. Tous les fragments plus courts que le fragment -?500/+?60 ont la m?me activit? minimale. En revanche, le fragment -?500/+?60?pr?sente une activit? 7?fois sup?rieure, sugg?rant la pr?sence d'un ?l?ment positif de r?gulation entre -?320 et -?500?pb. Cette activation n'appara?t plus au niveau du fragment -?730/+?60, indiquant la pr?sence d'un ?l?ment n?gatif entre -500 et -?730?pb. Un autre ?l?ment positif serait localis? entre -?1320 et -?1480?pb. L'activit? promotrice des fragments -?500/+?60 ? -?1640/+?60?est fortement induite (3 ? 10?fois) par la forskoline, sugg?rant que l'?l?ment positif de r?ponse entre -?320 et -?500?pb est d?pendant de l'AMPc. L'effet de la forskoline (10??M) est annul? par l'insuline (100?nM). Aucun effet de la dexam?thasone (1??M) ou du glucose (25?mM) n'a ?t? observ?. Ces r?sultats nous ont permis de pr?ciser les principales r?gions r?gulatrices impliqu?es dans l'expression sp?cifique de la G6Pase dans les cellules HepG2. |
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